在我们的实验工作中，如果采用一般实验手段无法得到目的基因时，可以进行实验室人工合成。 全基因合成操作程序 1. 我们将对您需要合成的基因全序列进行分析，检查基因内部是否含有重复序列。根据序列的具体情况设 计合成方案并通过业务员或技术员给您报价。 2. 在得到您认可后我们将立即进行单链 Oligo DNA 合成、 DNA 片段拼接等工作，然后把全长基因克隆于载体 中，再通过 DNA 测序确认合成基因的正确性。 3. 测序结果如果发现有错误位点，我们会采取相应的技术手段进行修复校对，保证整个序列的正确性。 4. 提供实验结果：包括实验操作规程、测序结果、测序彩色峰图、含有合成基因的质粒及含该质粒的菌体( 穿刺菌 )等。免费提供密码子优化！！ 基因合成应用 设计合成DNA疫苗 合成组织样本不易获得但序列已知的基因 设计基因治疗载体 合成经过密码子优化，提高外源表达的基因 用于微芯片的大量cDNA 根据基因结构功能研究的需要对基因进行修正 克隆人鼠抗体或重组抗体 合成序列保真度要求高，无突变或SNP存在的基因
Q1.化学合成基因的方法有哪些？ (1)全基因合成：一般对于分子较小而又不易得到的基因采用该方式。可将双链基因分成若干寡核苷酸单链片段(尤其待合成基因在100个核苷酸以上时)，每个片段长度控制在40～60个碱基，并使每对相邻互补的片段之间有大于6bp交叉重叠。在体外将所有对应的片段混合经PCR反应即可拼接得到较长的基因片段。采用分步连接、亚克隆的方法时，最后将亚克隆的较大片段重组为完整的基因。为便于亚克隆中回收基因片段，应在片段两侧设计合适的酶切位点；由于每个亚克隆可以分别鉴定，从而可减少顺序错误的可能性。 (2)酶促合成：此法又称基因的半合成法。全基因合成，特别是较大的基因的全部化学合成成本昂贵，使用半合成的方法可以降低成本，从而利于普及使用。首先合成末端之间有10～14个互补碱基的寡核苷酸片段，退火后以重叠区作为引物，在4种dNTP存在的条件下，通过DNA聚合酶或反转录酶的作用，获得两条完整的互补双链。合成基因的结构应包括有克隆和表达所需要的全部信号及DNA顺序，基因密码子的阅读框架也应该同表达体系相适应。此外，由于不同物种的密码子使用偏好性，在基因合成和克隆时必须考虑这个问题。可通过密码子优化获得高效表达。 Q 2. 为什么要进行全基因合成？ 最常见的获得目的基因的方法是PCR 扩增钓取基因。但很多的时候，扩增只会得到痕量或根本就得不到目的基因。如果用这种方法，首先，必须准备某一特定组织的cDNA文库，就必须花时间去准备或订购。其次，目的基因在文库中的含量必须充足，否则就可能会找不到合适的方法钓取或克隆得到。第三，PCR扩增得到的目的基因可能会含有许多点突变或单核苷酸多态性，这会给您后期的实验应用带来极大麻烦。 Q 3. 全基因合成一般服务流程是怎样的? (1) 客户提供所需要合成的基因序列信息，可从睿勉公司网站（www.ruimianbio.com）下载全基因合成订单，务必详细填写； (2) 本公司首先将对客户提供的基因全序列进行软件分析，检查基因内部是否含有重复序列及特殊结构，根据序列具体情况设计基因合成方案，并及时回信确认合成信息； (3) 在得到客户认可后签订基因合成协议，要求客户支付合成总费用的50％作为预付款； (4) 本公司收到预付款后立即安排生产，进行引物合成、DNA片段拼接等工作，将全长基因克隆于载体中，通过DNA测序确认合成基因的正确性；对错误位点用定点突变方法进行修复，最后得到与客户提供序列完全一致的基因； (5) 基因合成结束，通知客户支付剩余的50％合成款项； (6) 待客户付余款之后及时给客户发货。 Q 4. 合成的基因有长度限制吗？ 可以合成任何长度的基因。 Q 5. 密码子优化有必要吗？ 有必要。不同来源的种属密码子的偏好性不同。比如，在人体内受偏爱的密码子对于E. coli来说可能是稀有的。睿勉公司已经为国内外客户优化了大量的基因，有自主研发的专业软件。可免费为客户提供密码子优化服务。 Q 6. 睿勉公司的标准免费克隆载体是什么？ (1) pUC系列（pUC18/pUC19/pUC57），pBluescript II SK(+)，PCR2.1等载体：含有若干常用限制性内切酶识别序列； (2) pTG19-T 载体：适用于T/A克隆；另外，本公司还有近300种商业表达载体（如pET系列，pPIC系列）可供基因合成后克隆选择；若有特殊要求，需换到一些特殊载体或改造过的载体，为方便后续实验的及时进行，请提供载体及相关的载体信息。 Q 7. 睿勉公司的合成时间如何? 1500bp以内的常规基因，承诺15个工作日内发货。 Q 8. 为什么基因合成的费用比引物合成高的多? 基因合成包括一个完整的流程：序列分析、优化、引物设计与合成、引物拼接与PCR扩增，PCR产物的T/A克隆，测序筛选，点突变修复、发货准备等一整套服务，而引物合成只是基因合成工作中的一小部分。如同买一辆汽车与买一堆铁块和橡胶是一个道理。 Q 9. 基因合成必须要提供基因序列吗? 是的。您必须提供AA序列或者DNA序列。我们只根据您提供的序列进行基因合成，可以提供免费密码子优化，但是不提供基因序列的查询服务。 Q 10. 必须要签定合同与交纳50%预付款吗? 是的，为保障双方权利与信誉，应该这么做。 Q 11. 质量如何保证? 时间如何保证? 所有在 睿勉合成的基因，都经过100%测序验证。 睿勉公司基因部拥有独立的分子生物学实验平台；本公司引物合成部、测序部，分子生物学试剂盒部，是基因合成部的根本保障。基因部主管拥有十年以上专业合成基因的工作经验，基因合成的工作团队均经过专业、严格的培训，能保证所承接项目顺利进行。 Q12.什么样的基因是复杂基因? 低GC含量序列：低GC含量的基因序列一般是指全长GC含量低于20%的基因，或100bp以内GC含量少于10%的序列；对于低GC片段，不包含发卡结构、反义互补、重复等其它复杂结构，一般将其分割成200bp/段来合成，然后通过合适的内切限制酶酶切后连接（常用BsaI和BpiI，所以序列本身最好不含有这两种酶切识别序列），这样更易得到正确的克隆，但是发货期将比正常序列更长一些，而且价格也比常规基因稍贵。一般低GC序列都可以合成并可通过测序验证。 高GC含量：高GC序列一般是指GC含量高于70%的序列或100bp以内GC含量高于80%的序列；与低GC序列不同，高GC序列难于测序，所以GC>75%的序列合成业务，请特别询价，对于此类序列也需要将其分割成300bp的片段来合成，需要合适的内切限制酶，如BsaI 和 BpiI。 反义互补重复序列：由于此类结构序列也不易于测序，所以我们一般不承接反义互补重复序列合成业务。 复杂基因与常规基因相比，合成费用较高，合成时间相对延长。对于复杂基因，可通过密码子优化，尽量减少基因序列中的重复序列，高GC%区和二级结构区。 Q 13.客户收到的基因为什么质粒切不动，或切不全? 可能原因如下： (1) 质粒上酶识别序列不正确或者没有； (2) 酶切反应条件不合适 (3) 限制性内切酶对DNA甲基化敏感； (4) 内切酶稀释不正确或加入方法不正确； (5) 甘油浓度过高； (6) 限制性内切酶已部分或全部失活； (7) 保护碱基引入导致侧翼链锁死酶切位点。 对策： (1) 检查质粒DNA中是否存在可被限制酶识别的DNA序列。 (2) 优化酶反应体系，使用随酶提供的反应缓冲液；增大酶量或更换新酶。 (3) 检查DNA是否已被甲基化，所用的酶是否对甲基化敏感。 (4) 更换保护碱基，或PCR扩增目的片段，酶切PCR产物。 Q 14. 如何运输以及保存质粒及其菌株？ 我们为您提供含有完全正确的基因序列的质粒（不少于5ug）两管。质粒可常温运输，溶解后需－20℃保存，并尽量避免反复冻融。 Q 15. 客户提供样品做相关服务时，送样要求有哪些？ 质粒样品，可以是穿刺菌、甘油菌、冻干质粒或质粒溶液等形式。 （1）穿刺菌：请提供穿刺培养的单克隆菌落。穿刺培养的菌可以长时间保存而不会导致质粒的拷贝数明显下降。样品请在1.5ml或2ml的Eppendorf管中加入相应抗生素的固体LB培养基，然后将单菌落用牙签穿刺于LB固体培养基中。 （2）菌液：请将过夜培养的菌液加灭菌甘油至终浓度20%保存于1.5ml或2ml的Eppendorf管中，注意封口，以免污染。 （3）质粒：请提供3-5ug溶于无菌去离子水的质粒溶液或者抽干质粒。 （4）注意： a. 请将装有样品的Eppendorf 管口用封口膜封紧，防止运输途中开盖导致样品污染或者丢失。 b. 请在管壁上注明质粒名称及抗性。 c. 载体其他信息请以邮件或便签等形式告知。
通过实验方法可以有效地向目的基因片段中引入任何所需的 DNA 变异，包括碱基添加、删除、点突变等。 服务要求 1. 请您通过业务员或技术员提供需要进行突变基因的全部详细序列；突变前序列请标注为： Wild sequence ；突变后序列请标注为： Mut sequence 。 2. 请提供突变基因克隆操作的详细背景资料，例如使用何种限制酶酶切位点、克隆于何种载体等。 3. 请说明实验的具体要求。 操作程序 1. 如您提供的模板序列为非睿勉生物的测序结果，我们将首先对模板进行测序并将与您沟通测序结果。 2. 根据突变方案设计合成突变引物，进行基因突变实验的 PCR 反应，克隆变异体。 3. 进行 DNA 测序验证突变序列的正确性。 4. 提供实验结果，包括实验操作规程、突变用引物、质粒变异体以及含有该质粒的菌种（穿刺菌）、测序结 果、测序彩色峰图等。 5. 1 kbp 以下的 DNA 片段克隆在普通载体上的单点突变的时间约需 10 天左右。 收费标准
基因组 DNA 的提取 可以从多种材料中提取基因组 DNA ，不同种类的材料中提取的 DNA 量不同，而且差异也比较大，现就一般材料的基因组 DNA 提取情况列表如下：
说明： 1. 每种材料必须保证尽量新鲜。 2. 实验完成后，提供 DNA 样品、电泳照片、 OD值测定结果等。
合成任何基因 Gene-Target TM技术平台可以合成任何基因，包括富含特殊结构如：重复序列（重复次数无限制）、高GC含量、发夹结构、连续单一碱基重复等的复杂基因。 克隆基因到任何载体 CloneEZ®无缝克隆技术可以将合成基因克隆至任何目的载体，交付后可直接用于后续操作实验。 快速合成基因 睿勉快速基因合成服务为您快速交货，合成2 kb以内的基因，最短仅需4个工作日。 良好的客户信任度 服务质量可靠，提供DNA测序结果，保证所合成的基因序列100%准确。睿勉为客户合成的许多基因，在其发表的高水平文章中得到引用。 保证客户信息安全 特有的安全制度保证客户的信息安全，公司严格按照与用户签定的基因合成服务协议和保密合同执行服务。 |
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